期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
摘要
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到8,911篇文章
< 1 2 … 250 >
每页显示 20 50 100
已选0条
引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
实时PCR熔解曲线技术用于门诊听力损失患者基因筛查 认领 引用
1
作者 陈嘉菲 陈小露 +1 位作者 张国旺 王旭东 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2026年第8期766-772,共7页
目的使用实时PCR熔解曲线技术对门诊听力损失患者的4个耳聋基因的20种突变位点进行基因筛查,探索该基因筛查技术在临床中的应用价值。方法收集2021年12月至2022年12月就诊于厦门市妇幼保健院(厦门大学附属妇女儿童医院)的220例门诊听力... 目的使用实时PCR熔解曲线技术对门诊听力损失患者的4个耳聋基因的20种突变位点进行基因筛查,探索该基因筛查技术在临床中的应用价值。方法收集2021年12月至2022年12月就诊于厦门市妇幼保健院(厦门大学附属妇女儿童医院)的220例门诊听力损失患者(男性143例,女性77例)的唾液或口腔拭子样本,使用实时PCR熔解曲线技术检测GJB2、SLC26A4、GJB3和MT-RNR1基因的20个突变位点,并使用Sanger测序进行结果验证。结果220例门诊听力损失患者中轻度听力损失103例(46.8%),中度听力损失31例(14.1%),重度听力损失13例(5.9%),极重度听力损失31例(14.1%),双侧不对称听力损失42例(19.1%)。220例患者的唾液或口腔拭子样本基因组DNA的浓度为6.3~141.5 ng/μL,平均为(27.5±17.3)ng/μL。34例患者(15.5%)检测到耳聋基因突变,其中GJB2基因突变18例(8.2%),SLC26A4基因突变10例(4.6%),GJB3基因突变3例(1.4%),MT-RNR1基因均质突变2例(0.9%),GJB2/SLC26A4双基因突变1例(0.5%),与Sanger测序结果一致率为100%。GJB2基因c.235delC和SLC26A4基因c.919-2A>G是我院门诊听力损失患者的常见热点突变。结论实时PCR熔解曲线技术操作简便、检测速度快、灵敏度高、结果自动判读,且唾液或口腔拭子这种无创取样方式具有操作简便,避免采血疼痛和感染风险等优点,因此,基于唾液或口腔拭子的实时PCR熔解曲线分析技术在新生儿听力-耳聋基因联合筛查中具有推广和应用前景。 展开更多
关键词 听力损失 实时PCR 熔解曲线分析 唾液 基因筛查
暂未订购 下载PDF
实时PCR技术用于HPV分型检测及其在宫颈癌筛查中的临床意义 认领 引用
2
作者 陈剑锋 《中国科技期刊数据库 医药》 2025年第6期042-045,共4页
探讨实时PCR技术在HPV分型检测中的应用效果及其对宫颈癌筛查的临床意义。方法 选取2024年梧州市人民医院收治的300例25-35岁宫颈癌患者，随机分为对照组和观察组各150例。对照组采用传统HPV DNA杂交捕获法检测，观察组则利用实时PCR技... 探讨实时PCR技术在HPV分型检测中的应用效果及其对宫颈癌筛查的临床意义。方法 选取2024年梧州市人民医院收治的300例25-35岁宫颈癌患者，随机分为对照组和观察组各150例。对照组采用传统HPV DNA杂交捕获法检测，观察组则利用实时PCR技术进行HPV分型检测。结果 观察组HPV分型检测的准确率、特异性及敏感性均显著高于对照组，且实时PCR技术能更准确地识别高危型HPV感染，提高宫颈癌早期筛查的准确性。结论 实时PCR技术在宫颈癌筛查中具有显著的临床应用价值，能有效提升HPV分型检测的准确性和宫颈癌的早期诊断率。 展开更多
关键词 实时PCR技术 HPV分型检测 宫颈癌筛查 临床意义 早期诊断
暂未订购 下载PDF
实时PCR检验在高危型人乳头瘤病毒诊断中的应用准确性分析 认领 引用
3
作者 覃认 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2025年第2期107-110,共4页
分析高危型人乳头瘤病毒应用实时聚合酶链式反应（PCR）检验诊断的应用准确性。方法 本研究自2020年1月起开始收集临床患者资料，直至2024年1月共收集100例高危型人乳头瘤病毒感染患者及20例健康人群作为观察对象，所有观察对象入院后... 分析高危型人乳头瘤病毒应用实时聚合酶链式反应（PCR）检验诊断的应用准确性。方法 本研究自2020年1月起开始收集临床患者资料，直至2024年1月共收集100例高危型人乳头瘤病毒感染患者及20例健康人群作为观察对象，所有观察对象入院后分别进行二代杂交式捕获检测技术及实时PCR检验，比较诊断结果、疾病不同分期检出情况、病变类型检出情况、检验满意度。结果 实时PCR检验技术的准确度、灵敏度及特异度均高于二代杂交式捕获检测技术（P＜0.05）；实时PCR检验技术Ⅰ级、Ⅱ级检出率均高于二代杂交式捕获检测技术（P＜0.05），二代杂交式捕获检测技术Ⅲ级检出率与实时PCR检验差异不明显（P＞0.05）；实时PCR检验技术不同病变类型检出率均高于二代杂交式捕获检测技术（P＜0.05）；实时PCR检验技术满意度更高（P＜0.01）。结论 在为高危型人乳头瘤病毒选择合适的诊断方式时，应用实时CPR检验可获得较为理想的诊断效果，且在不同分期及病变类型方面检出率均较高，有助于临床及时筛查疾病并采取对症措施。 展开更多
关键词 实时PCR检验 高危型人乳头瘤病毒 诊断结果 疾病分期
暂未订购 下载PDF
一种高灵敏度、高特异性的猴痘病毒TaqMan实时PCR检测方法的开发与临床验证 认领 引用
4
作者 杨勇 杨柳青 +8 位作者 薛哲强 黄俊驹 彭海龙 谭瑾琳 吴玉莹 张嘉 何利榕 王福祥 谢龙 《分子诊断与治疗杂志》 2025年第6期1166-1168,1172,共3页
目的开发并验证一种以猴痘病毒(MPXV)F3L为靶点的实时荧光PCR检测方法,助力MPXV的快速、准确诊断。方法基于MPXV F3L基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为标准品。系统性评估其最低检测限(LOD)、精密度和特异性,并通过... 目的开发并验证一种以猴痘病毒(MPXV)F3L为靶点的实时荧光PCR检测方法,助力MPXV的快速、准确诊断。方法基于MPXV F3L基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为标准品。系统性评估其最低检测限(LOD)、精密度和特异性,并通过临床样本验证临床诊断效能,并与病毒培养法对比。结果MPXV PCR检测方法的LDO为200 copies/mL(95%CI:152~274 copies/mL)。批内和批间变异系数均小于5%,对30种相关病原体无交叉反应。临床验证(358例疑似患者,462份样本)显示,皮疹拭子和咽拭子样本灵敏度分别为98.89%(95%CI:97.36~100.00)和86.44%(95%CI:77.71~95.18),特异性均为100%(95%CI:100.00~100.00),受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)(0.99和0.93)均显著高于病毒培养法(0.69,Delong test's P<0.05)。结论本MPXV PCR检测方法高灵敏、高特异,具有显著临床应用潜力,为猴痘(Mpox)诊断提供了可靠分子工具。 展开更多
关键词 猴痘病毒 实时荧光PCR F3L基因 临床验证
暂未订购 下载PDF
多重实时PCR检测产毒素性霍乱弧菌和副溶血弧菌 认领 引用 被引量：20
5
作者 张蔚 潘劲草 +3 位作者 孟冬梅 于新芬 汪皓秋 郑伟 《微生物学通报》 CAS 北大核心 2007年第5期950-954,共5页
设计引物和探针,优化多重实时PCR条件,以同时检测霍乱弧菌霍乱毒素基因ctxA、副溶血弧菌种特异性基因gyrB和耐热肠毒素基因tdh。该多重实时PCR方法检测产毒素性的O1群(3株)和O139群(44株)霍乱弧菌菌株、不产毒素的O1群(12株)和O139群(6... 设计引物和探针,优化多重实时PCR条件,以同时检测霍乱弧菌霍乱毒素基因ctxA、副溶血弧菌种特异性基因gyrB和耐热肠毒素基因tdh。该多重实时PCR方法检测产毒素性的O1群(3株)和O139群(44株)霍乱弧菌菌株、不产毒素的O1群(12株)和O139群(6株)及非O1非O139群(7株)霍乱弧菌菌株的ctxA,阳性和阴性结果与普通PCR检测结果100%符合;检测副溶血弧菌种特异性gyrB,116株副溶血弧菌均阳性,而9株其它细菌和72株霍乱弧菌均阴性;检测tdh的阳性和阴性结果也与普通PCR结果完全一致。另外还建立了检测副溶血弧菌菌株trh1和trh2的单重实时PCR方法。 展开更多
关键词 多重实时PCR 毒力基因 霍乱弧菌 副溶血弧菌
暂未订购 下载PDF
改良分子信标-实时PCR快速检测副溶血弧菌 认领 引用 被引量：21
6
作者 扈庆华 郑薇薇 +4 位作者 石晓路 李庆阁 王冰 庄志雄 刘小立 《现代预防医学》 CAS 2004年第3期441-443,共3页
目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FA... 目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 。 展开更多
关键词 分子信标 实时PCR 快速检测 副溶血弧菌 食物中毒
暂未订购 下载PDF
SYBR GreenⅠ实时PCR技术鉴定鸭源性成分的研究 认领 引用 被引量：12
7
作者 杨丽霞 宋涛平 +3 位作者 谢晓红 付冠艳 刘佩 彭新凯 《中国农学通报》 CSCD 2013年第11期16-19,共4页
为建立灵敏、可靠的食品中鸭源性成分鉴定方法,确定了一对可特异地检测出牛肉中所掺杂鸭肉成分的引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时PCR技术检测鸭肉的方法。结果表明:利用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术可检测到鸭肉DNA,通过熔解曲线能有效地区... 为建立灵敏、可靠的食品中鸭源性成分鉴定方法,确定了一对可特异地检测出牛肉中所掺杂鸭肉成分的引物,建立了SYBR Green Ⅰ实时PCR技术检测鸭肉的方法。结果表明:利用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术可检测到鸭肉DNA,通过熔解曲线能有效地区分特异性产物,检测灵敏度可达到1pg DNA。同时利用该方法可检测出熟牛肉、鸭肉混合样品中的鸭肉成分。SYBR Green Ⅰ实时PCR方法能快速、特异、灵敏的检测鸭肉成分。 展开更多
关键词 SYBR Green Ⅰ实时PCR 鸭肉 线粒体DNA 熔解曲线
暂未订购 下载PDF
实时PCR在大肠杆菌O157∶H7快速检测中的应用 认领 引用 被引量：13
8
作者 张建华 陆群英 +3 位作者 程苏云 卢亦愚 叶菊莲 罗芸 《中国人兽共患病学报》 CAS 北大核心 2007年第8期839-841,M0004,共3页
目的建立一种快速、敏感、特异的大肠杆菌O157∶H7的定量检测方法。方法根据GenBank公布的O157∶H7大肠杆菌rfbE基因序列,应用分子生物学软件进行序列比对,在该基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实... 目的建立一种快速、敏感、特异的大肠杆菌O157∶H7的定量检测方法。方法根据GenBank公布的O157∶H7大肠杆菌rfbE基因序列,应用分子生物学软件进行序列比对,在该基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测大肠杆菌O157∶H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。结果所有大肠杆菌O157∶H7菌株的检测结果均为阳性,而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1cfu/μL,重复性检测的变异系数均小于5%。在模拟污染牛奶中,可检出1×102cfu/μL的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3h。结论本研究建立的基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于大肠杆菌O157∶H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。 展开更多
关键词 实时PCR Taqman探针 大肠杆菌O157:H7 检测
暂未订购 下载PDF
应用Taqman实时PCR法检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌 认领 引用 被引量：6
9
作者 闫琳 王晓英 +3 位作者 郭云昌 裴晓燕 余东敏 杨大进 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期177-183,共7页
目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。... 目的建立敏感快速的检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的实时PCR方法。方法以hlyA基因为靶标,建立并验证实时PCR法的特异性。选用单核细胞增生李斯特菌CMCC 54004,制备不同浓度的纯菌液,用实时PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率。进行人工染菌实验,染菌量分别为每25g猪肉样本1.3×100、1.3×101、1.3×102、1.3×103、1.3×104、1.3×105和1.3×106CFU。分别在增菌0、4、8、12、18、24、30、36和46 h取1 ml培养液,提取DNA进行实时PCR检测,并用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性。采集24份市售猪肉样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出率。结果建立的实时PCR法特异性好,对纯菌液的检出限为1.3×103CFU/ml。人工染菌样本增菌24 h后,实时PCR检出限1.3 CFU/25 g,PCR及传统方法达到这一检出限需要增菌46 h。根据增菌24 h的检测结果,建立实时PCR样本标准曲线。24份猪肉样本,实时PCR检出17份阳性,阳性率70.83%(17/24),与PCR和传统方法的阳性率一致。根据所得的样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌。结论所建立的实时PCR具有快速简便、敏感特异等优点,整个操作可在27 h内完成,适用于猪肉中单核细胞增生李斯特菌的快速定量检测。 展开更多
关键词 实时PCR 单核细胞增生李斯特菌 检测 猪肉
暂未订购 下载PDF
实时PCR技术在龋易感儿童牙菌斑致龋菌定量检测中的应用 认领 引用 被引量：10
10
作者 梁景平 姜云涛 +1 位作者 李超伦 姜葳 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第2期128-132,共5页
目的 建立定量检测致龋菌的快速、敏感、特异的方法。分析牙菌斑中主要致龋菌数量与乳牙龋失补牙面（dmfs）指数的关系。方法 牙菌斑组织取自45例学龄前儿童，其中无龋（drnfs=0）、中龋（dmfs=4—6）和高龋（dmfs〉8）组各15例。应用SY... 目的 建立定量检测致龋菌的快速、敏感、特异的方法。分析牙菌斑中主要致龋菌数量与乳牙龋失补牙面（dmfs）指数的关系。方法 牙菌斑组织取自45例学龄前儿童，其中无龋（drnfs=0）、中龋（dmfs=4—6）和高龋（dmfs〉8）组各15例。应用SYBR Green I模式的实时PCR技术，对各组儿童牙菌斑中4种主要致龋菌（变异链球菌、远缘链球菌、黏性放线菌和内氏放线菌）进行定量检测，并计算各致龋菌所占总菌的比例。对各组所获数据进行统计学分析。结果 高龋组中4种致龋菌所占总菌的比例均高于无龋组（P〈0．01），其中变异链球菌和远缘链球菌的数量之和所占总菌的比例与dmfs指数具有良好的线性关系。结论 实时PCR技术可作为一种细菌定量检测方法，应用于致龋菌的定量分析和龋齿活跃件的评估。 展开更多
关键词 实时PCR 龋病易感性 致龋菌 牙菌斑
暂未订购 下载PDF
致牛呼吸道疾病综合征主要病毒SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法的建立与应用 认领 引用 被引量：12
11
作者 姜晓霞 孙晓波 +5 位作者 王以欣 张晓梅 赵毅 乔薪瑗 徐义刚 贾烁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期269-277,共9页
为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基... 为鉴别检测引起牛呼吸道疾病综合征的主要病毒性病原,包括牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒(BPIV),本研究分别以IBRV g B基因、BVDV 5′-UTR基因、BRSV N基因和BPIV HN基因为靶基因,通过BLAST比对,基于靶基因的保守区域设计引物,经过反应体系优化,建立了检测IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的单一和多重SYBR GreenⅠ实时PCR方法。结果显示,建立的方法检测灵敏性高,对IBRV、BVDV、BRSV和BPIV的最低检测限分别为5.86×101、5.02×101、1.02×102和2.42×101copies/μL。检测特异性强,仅IBRV、BVDV、BRSV和BPIV为方法阳性,其他病毒均为阴性。采集了259份临床表现为呼吸道疾病症状的牛血液样本,利用建立的方法进行检测,结果显示,阳性检出率分别为BVDV 22.78%、BPIV 11.97%、IBRV 5.02%、BRSV 31.66%,经基因测序复核,本方法的检测准确率为100%。此外,在阳性样本中存在多种病毒混合感染的情况,其中BRSV和BVDV混合感染率为5.02%,BRSV和BPIV混合感染率为3.47%,BPIV和BVDV混合感染率为1.93%,BRSV和IBRV混合感染率为1.16%,BRSV、BVDV和BPIV混合感染率为0.39%。以上结果表明,本研究建立的方法具有良好的检测灵敏性、特异性和准确性,可同时检测IBRV、BVDV、BPIV和BRSV,为病毒性牛呼吸道疾病综合征主要病原的快速检测和流行病学调查提供了必要的技术支持。 展开更多
关键词 牛呼吸道疾病综合征 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛副流感病毒 牛呼吸道合胞体病毒 SYBR GreenⅠ实时PCR方法
暂未订购 下载PDF
实时PCR技术在植物研究上的应用 认领 引用 被引量：5
12
作者 童汉华 邬亚文 +2 位作者 章善庆 曹一平 罗利军 《中国生物工程杂志》 CAS 北大核心 2005年第5期15-21,共7页
实时PCR是在常规PCR基础上运用荧光共振能量转移现象,加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起的一项新技术,具有快速、灵敏、特异性强、定量准确等特点,广泛应用于医学、检验检疫、军事、农业、基... 实时PCR是在常规PCR基础上运用荧光共振能量转移现象,加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起的一项新技术,具有快速、灵敏、特异性强、定量准确等特点,广泛应用于医学、检验检疫、军事、农业、基础研究等领域。着重就实时PCR技术的特性及在植物上的应用进行了讨论,并与目前常用的相关技术进行了比较。 展开更多
关键词 实时PCR技术 植物 核酸定量技术 基因检测
暂未订购 下载PDF
转基因玉米Mir162品系的实时PCR及可视芯片检测方法研究 认领 引用 被引量：7
13
作者 邓婷婷 黄文胜 +2 位作者 吴亚君 韩建勋 陈颖 《植物检疫》 北大核心 2012年第5期14-18,共5页
本研究以转基因玉米品系Mir162的性状基因vip3a为靶标,建立了实时荧光PCR和可视芯片检测方法。结果表明两种方法都能特异性检测玉米Mir162品系,其中实时荧光PCR检测的相对灵敏度可达0.001%,可视芯片检测灵敏度达0.01%。本研究建立的方... 本研究以转基因玉米品系Mir162的性状基因vip3a为靶标,建立了实时荧光PCR和可视芯片检测方法。结果表明两种方法都能特异性检测玉米Mir162品系,其中实时荧光PCR检测的相对灵敏度可达0.001%,可视芯片检测灵敏度达0.01%。本研究建立的方法可用于进境转基因玉米中Mir162品系的检测。 展开更多
关键词 转基因玉米 Mir162 实时PCR 可视芯片检测
暂未订购 下载PDF
采用实时PCR技术比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果 认领 引用 被引量：3
14
作者 陈盛霞 吴亮 +5 位作者 沈玉娟 章秋霞 李婷婷 姜旭淦 徐馀信 曹建平 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2009年第2期130-134,共5页
目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K... 目的比较不同方法提纯隐孢子虫卵囊DNA的效果。方法将分离纯化的隐孢子虫卵囊分别加入美国Promega公司(简称Promega)和上海捷瑞公司(简称捷瑞)基因组DNA纯化试剂盒的裂解液、2%TritonX-100和5%异硫氰酸胍,同时联合使用冻融法、蛋白酶K法和声裂法裂解卵囊,用试剂盒法或Chelex-100法提纯卵囊基因组DNA,用实时PCR测定隐孢子虫卵囊囊壁蛋白(COWP)基因拷贝数,以Promega试剂盒为参照比较不同纯化方法的提纯效果。结果Promega试剂盒的裂解液裂解隐孢子虫卵囊的效果最好,纯化所得卵囊COWP基因拷贝数可达(6.45～9.86)×106;其他依次为捷瑞试剂盒的裂解液[(2.38～3.69)×106]、5%异硫氰酸胍[(1.27～21.29)×105]和2%TritonX-100[(2.06～866.70)×103]。冻融法+蛋白酶K法+声裂法提纯隐孢子虫卵囊DNA效果最佳,其次为冻融法+声裂法和蛋白酶K法+声裂法,冻融法+蛋白酶K法效果最差。结论冻融法+蛋白酶K法+声裂法联合使用能使卵囊DNA的提纯效率达到最大,捷瑞基因组DNA纯化试剂盒和5%异硫氰酸胍裂解法提纯隐孢子虫卵囊DNA可获得与Promega试剂盒相近的效果。 展开更多
关键词 隐孢子虫 卵囊 实时PCR DNA 提纯
暂未订购 下载PDF
改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌 认领 引用 被引量：21
15
作者 吴平芳 石晓路 +9 位作者 郑琳琳 扈庆华 李庆阁 张佳峰 庄志雄 刘小立 张顺祥 王冰 贺连华 林一曼 《中国卫生检验杂志》 2006年第4期394-395,468,共2页
目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于... 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。 展开更多
关键词 志贺菌 改良分子信标 实时PCR 检测
暂未订购 下载PDF
TaqMan-MGB探针实时PCR用于Duffy血型基因分型的研究 认领 引用 被引量：4
16
作者 周世航 刘铭 +1 位作者 于卫建 梁晓华 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期57-61,共5页
目的应用Taq Man-MGB探针实时PCR技术,建立1个Duffy血型基因分型的新方法,了解大连地区汉族人群Duffy血型等位基因频率分布特征。方法设计并合成Taq Man-MGB探针实时PCR的引物和探针,应用TaqMan-MGB探针实时PCR对120例健康献血者的Duff... 目的应用Taq Man-MGB探针实时PCR技术,建立1个Duffy血型基因分型的新方法,了解大连地区汉族人群Duffy血型等位基因频率分布特征。方法设计并合成Taq Man-MGB探针实时PCR的引物和探针,应用TaqMan-MGB探针实时PCR对120例健康献血者的Duffy血型进行基因分型,对其重复性和最低检出限进行评价。并将该法和传统的等位基因特异性引物PCR(PCR-ASP)方法进行比较。结果 Taq Man-MGB探针实时PCR方法和PCR-ASP法对Duffy血型的基因分型结果是完全一致的。Taq Man-MGB探针实时PCR再次分型结果和初次基因分型的结果是完全一致的。Taq Man-MGB探针实时PCR的最低检测限是100 pg。大连汉族人群Duffy血型FY*A基因频率为93.3%,FY*B的基因频率为6.7%,其基因分布特点和国内其他地区汉族人群相似,无显著性差异(P>0.05),但与浙江畲族相比,有显著性差异(P<0.05)。Fya和Fyb抗原不配合几率为0.116 7。结论应用Taq ManMGB探针实时PCR技术建立的Duffy血型基因分型方法具有快速、简单、准确、灵敏、重复性好、通量高等特点,优于传统的PCR-ASP法。 展开更多
关键词 实时PCR Duffy血型 基因分型
暂未订购 下载PDF
猴痘、天花病毒感染快速分子诊断荧光定量实时PCR方法的建立 认领 引用 被引量：22
17
作者 周为民 谭文杰 +3 位作者 郑楠 张陵林 王慧娟 阮力 《生物技术通讯》 2006年第5期703-706,共4页
目的:天花、猴痘可感染人并引起严重皮疹、发热等临床症状,均为烈性传染病,是潜在的生物恐怖因子,因此需要建立针对其感染的快速特异的诊断方法。方法:分别设计正痘病毒属通用型、天花病毒特异、猴痘病毒特异的引物与荧光标记探针,建立... 目的:天花、猴痘可感染人并引起严重皮疹、发热等临床症状,均为烈性传染病,是潜在的生物恐怖因子,因此需要建立针对其感染的快速特异的诊断方法。方法:分别设计正痘病毒属通用型、天花病毒特异、猴痘病毒特异的引物与荧光标记探针,建立荧光定量实时PCR方法,对人工合成或模拟样本进行检测。结果:可在4h内对天花或猴痘病毒感染进行特异性鉴别诊断,检测灵敏度可达100拷贝/25μL反应体积。结论:本方法可作为一种检疫与反恐应急储备技术。 展开更多
关键词 正痘病毒 天花病毒 猴痘病毒 实时PCR
暂未订购 下载PDF
巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR检测转基因大豆方法的研究 认领 引用 被引量：3
18
作者 彭新凯 宋涛平 +3 位作者 谭舸 陈娜 胡朝晖 杨丽霞 《中国农学通报》 CSCD 2012年第15期233-237,共5页
为了建立转基因大豆检测技术,采用巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR技术,检测转基因大豆外源基因(CaMV35S、CP4EPSPS)。结果表明,利用巢式PCR可检测出1 ng/μL转基因含量1%的大豆中的CaMV35S基因,而第一轮PCR的检测限为100 ng/μL;利用SYB... 为了建立转基因大豆检测技术,采用巢式PCR和SYBR Green Ⅰ实时PCR技术,检测转基因大豆外源基因(CaMV35S、CP4EPSPS)。结果表明,利用巢式PCR可检测出1 ng/μL转基因含量1%的大豆中的CaMV35S基因,而第一轮PCR的检测限为100 ng/μL;利用SYBR Green Ⅰ染料能结合双链DNA的特点,应用实时PCR技术可检测到CaMV35S、CP4EPSPS基因扩增所产生的信号,通过扩增产物的熔解曲线能有效地区分特异性产物,CaMV35S基因的检测限为0.1 ng/μL。同时利用该方法对黄豆、炒黄豆、豆干等样品进行检测,样品中未检出CaMV35S基因成分。巢式PCR方法明显提高了PCR的检测限,SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法能有效、快速检测CaMV35S转基因成分。 展开更多
关键词 转基因大豆 巢式PCR SYBR Green Ⅰ实时PCR 熔解曲线
暂未订购 下载PDF
猪繁殖与呼吸综合征病毒实时PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：28
19
作者 黄娟 姜平 +3 位作者 张常印 唐泰山 李永东 张治涛 《中国病毒学》 2005年第5期530-533,共4页
设计合成了一套引物和TaqMan探针,以扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的核衣壳蛋白基因,通过反应条件的优化,在国内首次建立了快速定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的实时PCR方法,并用该法检测患病猪的肺脏等样品。结果表明该方法具有较好的... 设计合成了一套引物和TaqMan探针,以扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒的核衣壳蛋白基因,通过反应条件的优化,在国内首次建立了快速定量检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的实时PCR方法,并用该法检测患病猪的肺脏等样品。结果表明该方法具有较好的特异性和重复性,对PRRSV细胞培养物的检测下限为0.01TCID50,敏感性比常规RT-PCR高100倍;对10份PRRS疑似猪肺脏样品检测5份为阳性,与病毒分离的阳性符合率为100%。该方法具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,在PRRSV的早期检测、预防控制、进出口检疫及基础研究中会起到重要作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 TaqMan 实时PCR
暂未订购 下载PDF
SYBR~ Green Ⅰ实时PCR检测转Cry1Ab/c基因水稻 认领 引用 被引量：4
20
作者 王东 宋君 +1 位作者 雷绍荣 刘勇 《中国测试》 CAS 2009年第3期84-86,共3页
为了建立转基因产品新型检测技术,采用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术和三对特异引物,检测抗虫转基因水稻外源基因(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c)。结果表明,利用SYBR Green Ⅰ染料能结合双链DNA的特点,应用实时PCR技术可检测到转Cry1Ab/c基因... 为了建立转基因产品新型检测技术,采用SYBR Green Ⅰ实时PCR技术和三对特异引物,检测抗虫转基因水稻外源基因(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c)。结果表明,利用SYBR Green Ⅰ染料能结合双链DNA的特点,应用实时PCR技术可检测到转Cry1Ab/c基因抗虫水稻外源基因(CaMV35S,NOS,Cry1Ab/c)扩增所产生的荧光信号,通过扩增产物的熔解曲线能有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体。SYBR Green Ⅰ实时PCR技术是转基因成分检测的一种新方法。 展开更多
关键词 生物安全 SYBR Green Ⅰ实时PCR 转基因抗虫水稻 外源基因 熔解曲线 检测
暂未订购 下载PDF
已选0条
引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 250 下一页 到第 页
在线咨询 使用帮助 返回顶部 意见反馈