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肉苁蓉饮片基原植物PCR-RFLP鉴别方法研究 认领 引用
1
作者 施文韬 李鹏飞 崔佳惠 《宁夏农林科技》 2026年第5期9-16,共8页
【目的】建立中药材肉苁蓉饮片基原植物肉苁蓉(Cistanche deserticola)和管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa)的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法。【方法】运用SnapGene软件对肉苁蓉、管花肉苁蓉ITS序列进行比对分析... 【目的】建立中药材肉苁蓉饮片基原植物肉苁蓉(Cistanche deserticola)和管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa)的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法。【方法】运用SnapGene软件对肉苁蓉、管花肉苁蓉ITS序列进行比对分析,筛选出差异性限制性内切酶位点,利用限制性内切酶对两者ITS序列PCR扩增产物进行酶切鉴别。主要对肉苁蓉饮片DNA提取方法,PCR扩增的退火温度、循环数及不同酶的扩增效果,酶切反应时间和酶切底物量进行优化,建立肉苁蓉饮片基原植物PCR-RFLP鉴别方法,并对该方法的稳定性、准确性进行考察。【结果】肉苁蓉饮片DNA适宜提取方法为试剂盒法,PCR扩增适宜退火温度为47℃、适宜循环次数为35次。限制性内切酶NcoI酶切反应适宜底物量为7.5μL、温度为37℃、反应时间为60 min,可将肉苁蓉PCR扩增产物切割成两个条带,分别在100~250 bp及500~750 bp之间存在条带,但对管花肉苁蓉PCR扩增产物无法切割,仅在750 bp处存在明显条带。【结论】建立了肉苁蓉饮片基原植物肉苁蓉、管花肉苁蓉的PCRRFLP鉴别方法,该方法相较于显微、成分鉴定更快捷精准。 展开更多
关键词 肉苁蓉饮片 基原植物鉴定 肉苁蓉 管花肉苁蓉 PCR-RFLP ITS序列
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非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型PCR-RFLP鉴别方法的建立 认领 引用
2
作者 孙仁杰 徐慧玲 +6 位作者 孙思琪 柴娟 虞一聪 谢荣辉 李肖梁 赵灵燕 张传亮 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2025年第5期1017-1028,共12页
本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常... 本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因Ⅰ型和Ⅱ型的PCR-RFLP鉴别方法。通过对ASFV基因Ⅰ型与基因Ⅱ型基因组序列的比对分析,针对B385R基因和B125R基因保守区设计1对特异性PCR-RFLP引物,与其他临床上常见的9种猪病病毒均无交叉反应。通过该引物扩增获得覆盖B646L基因全长的DNA片段作为检测靶标,结合BmgBⅠ酶切进行RFLP图谱分析,即可实现对B646L基因全序列的快速检测,有效区分ASFV基因Ⅰ型和Ⅱ型,最低检测DNA质量浓度可达到5 pg·mL-1。模拟临床样本的研究结果表明,本方法还能够有效应对实际检测中基因Ⅰ型和Ⅱ型的混合感染。综上,本方法操作简便、准确性高、特异性强、灵敏度高、成本较低,具有良好的应用前景,为基层兽医技术人员开展非洲猪瘟疫情的监测和流行病学研究提供了一种新方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅱ型
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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立 认领 引用
3
作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×106拷贝/μL~1.7×101拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等101份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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基于PCR-RFLP方法对酸枣仁和理枣仁真伪鉴别研究 认领 引用
4
作者 赖晶 马莉雅 +6 位作者 靳婉君 蔺瑞丽 史小亚 马潇 宋平顺 张明童 何小英 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2025年第11期1955-1965,共11页
目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGA... 目的:建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,以实现酸枣仁及其常见伪品理枣仁的快速鉴别。方法:对酸枣仁和理枣仁的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列进行限制性酶切位点分析,筛选出酸枣仁限制性酶切位点PaeR7I(C^TCGAG),以及理枣仁限制性酶切位点Hpy188I(TCN^GA),设计PCR-RFLP引物,并优化PCR-RFLP反应的关键参数,包括退火温度、循环数、底物量及酶切时间。结果:建立了酸枣仁、理枣仁的PCR-RFLP鉴别方法,在最佳反应条件下[退火温度为58~60℃、30个循环、鉴别引物(10μmol·L-1)各0.5μL],经PaeR7I酶酶切后,酸枣仁产生2条特异性DNA条带,理枣仁则无此条带;经Hpy188I酶酶切后,理枣仁产生2条特异性DNA条带,酸枣仁则无此条带。该方法具有良好的专属性,灵敏度高,可检测出掺有5%的理枣仁。结论:建立的PCR-RFLP法稳定性好,准确度高,可有效鉴别酸枣仁及其掺伪品理枣仁,为解决酸枣仁的质量控制问题提供了可靠的技术手段。 展开更多
关键词 酸枣仁 理枣仁 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别
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中药材地骨皮PCR-RFLP鉴别方法研究 认领 引用
5
作者 王庆 董文静 +3 位作者 张美 齐喜红 张宇欣 胡寒雪 《中国药事》 CAS 2025年第3期317-326,共10页
目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(... 目的:建立中药材地骨皮聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴别方法,有效区分地骨皮正伪品,保障其用药安全。方法:运用SnapGene软件对地骨皮正品来源中国枸杞(Lycium chinense)和宁夏枸杞(Lycium barbarum),伪品来源鹅绒藤(Cynanchum chinense)、黑果枸杞(Lycium ruthenicum)、香加皮(Periploca sepium)的ITS序列进行比对分析,筛选出差异限制性内切酶位点Eag I,利用Eag I对ITS序列PCR扩增产物进行酶切鉴别。主要对药材DNA提取方法,PCR扩增的退火温度、循环数及不同酶的扩增效果,酶切反应时间和酶切底物量进行优化,建立地骨皮PCR-RFLP鉴别方法,并对该方法的稳定性、准确性进行考察。结果:药材DNA适宜提取方法为试剂盒法,PCR扩增适宜退火温度为67℃、适宜循环数为35。Eag I酶切反应适宜底物量为25μL、温度为37℃、反应30min,地骨皮正品PCR扩增产物可被酶切产生酶切条带,而地骨皮伪品PCR扩增产物不能被酶切。结论:研究建立了地骨皮正伪品的PCR-RFLP鉴别方法,可为地骨皮市场流通鉴别提供技术支撑。 展开更多
关键词 地骨皮 正品药材 伪品 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性 鉴别方法
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改良型PCR-RFLP法快速检测降糖药物基因多态性组合 认领 引用
6
作者 翟振谦 饶梓雯 +3 位作者 孙良平 李力 龙玉舟 欧阳东成 《实验室检测》 2025年第22期13-15,共3页
目的建立一种聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的改良方法,实现与降糖药物疗效及不良反应相关的基因多态性快速检测。方法以2型糖尿病(type 2 diabe... 目的建立一种聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的改良方法,实现与降糖药物疗效及不良反应相关的基因多态性快速检测。方法以2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者及健康对照的外周血DNA为研究对象,设计覆盖SLC22A1(rs628031、rs12208357)、SLC47A1(rs2289669)、KCNJ11[rs5219(E23K)]、ABCC8、CYP2C9(*2、*3)和TCF7L2(rs7903146)等位点的多重引物体系,引入错配引物并结合顺序/并联酶切,优化扩增与条带判读。结果建立的体系最低DNA投料量5~10 ng,特异性>98%,批内/批间RSD<5%,与Sanger测序一致率达99%以上。单个96孔板可完成约80例检测,单样本成本低于测序的20%。初步临床分析提示部分基因型与二甲双胍或磺脲类疗效存在差异。结论改良型多重PCR-RFLP体系可在单管或分池流程下实现多位点联合判型,方法学性能稳定、成本可控;可作为测序技术的筛查性补充工具,用于降糖药物相关基因多态性检测。 展开更多
关键词 改良型PCR-RFLP 降糖药物 基因多态性 个体化用药 2型糖尿病
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一种鉴别山豆根的PCR-RFLP方法研究 认领 引用
7
作者 肖阳央 林锦锋 +3 位作者 张金聚 黄国凯 陆佳 刘潇潇 《中国药事》 CAS 2025年第9期1027-1037,共11页
目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化... 目的:建立鉴别山豆根的聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)方法,有效区分山豆根和混伪品苦参。方法:通过对山豆根和混伪品苦参的DNA条形码进行对比分析,寻找山豆根的关键差异性位点并建立相应的PCR-RFLP方法。此外,优化PCR-RFLP反应体系和程序,进行退火温度、反应循环数、仪器品牌、样品DNA模板量、酶切反应体系的方法学考察。结果:山豆根和混伪品苦参的ITS2序列具有明显差异,山豆根序列有1个关键差异性位点可被限制性内切酶BamHI识别和酶切。经PCR-RFLP反应后,山豆根在200~300 bp附近有2条条带,混伪品苦参无条带。其中,最适退火温度为58℃,最适循环次数为35次。结论:建立了有效区分山豆根和混伪品苦参的PCR-RFLP方法。 展开更多
关键词 山豆根 苦参 ITS2 BamHI 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析
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CRP配套系B系猪H-FABP基因PCR-RFLP的研究 认领 引用 被引量：1
8
作者 白小青 王金勇 +5 位作者 陈四清 童晓莉 王可甜 张凤鸣 王涛 潘红梅 《上海畜牧兽医通讯》 2005年第5期18-19,共2页
本文利用PCR—RFLP技术对CRP配套系B系猪的心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因5’-端上游区和第二内含子内的遗传变异进行了研究。结果表明:B系猪H-FABP基因的5’上游区存在HinfⅠ-RFLP多态,第二内含子区只存在HaeⅢ-RFLP多态,而MspⅠ-RFL... 本文利用PCR—RFLP技术对CRP配套系B系猪的心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因5’-端上游区和第二内含子内的遗传变异进行了研究。结果表明:B系猪H-FABP基因的5’上游区存在HinfⅠ-RFLP多态,第二内含子区只存在HaeⅢ-RFLP多态,而MspⅠ-RFLP呈现单一的AA型。 展开更多
关键词 猪 心脏脂肪酸结合蛋白基因 PCR-RFLP PCR-RFLP技术 CRP配套系 H-FABP基因 B系猪 脂肪酸结合蛋白 第二内含子 遗传变异 AA型 Msp
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药用植物束花石斛、流苏石斛及其形态相似种的PCR-RFLP鉴别研究 认领 引用 被引量：45
9
作者 张婷 徐珞珊 +3 位作者 王峥涛 周开亚 张宁 史永峰 《药学学报》 CAS 北大核心 2005年第8期728-733,共6页
目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石... 目的建立简易的采用rDNAITS区作为分子标记对中药石斛的基源植物进行分子鉴定的技术。方法用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCRRFLP)方法获得ITS片段的限制性图谱。束花石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用ClaI和ApaLI酶切,流苏石斛及其形态相似种的PCR扩增产物用SphI酶切。结果根据预测的PCRRFLP图谱,可以鉴别药用植物束花石斛、流苏石斛及它们的形态相似种。用这种方法鉴定了市场上收集的25件商品束花石斛、流苏石斛新鲜药材的原植物。结论rDNAITS的PCRRFLP可用于鉴定石斛药材的原植物,具有简便、费用低的优点。 展开更多
关键词 石斛 束花石斛 流苏石斛 ITS区 PCR-RFLP
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我国主要地方绵羊品种mtDNA D-loop区PCR-RFLP研究 认领 引用 被引量：26
10
作者 李祥龙 张增利 +3 位作者 巩元芳 刘铮铸 贾青 王立泽 《遗传》 CAS 北大核心 2006年第2期165-170,共6页
利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,... 利用5种限制性内切酶(HinfⅠ,MspⅠ,Sau3AⅠ,XspⅠ,TaqⅠ),采用PCRRFLP技术研究了我国9个地方绵羊品种以及2个引入品种共计83只绵羊个体线粒体DNADloop区的多态性。结果表明,我国主要地方绵羊品种线粒体DNADloop区存在两种基本单体型,提示我国主要地方绵羊品种起源于两个母系祖先。线粒体DNADloop区多态度为0.0421%,说明我国地方绵羊品种线粒体DNA多态度较为贫乏。 展开更多
关键词 地方绵羊品种 线粒体DNA D-loop PCR-RFLP
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应用RAPD标记和细胞质基因组PCR-RFLP技术研究大花蕙兰的遗传多样性 认领 引用 被引量：16
11
作者 甘娜 谭向红 +2 位作者 陈其兵 魏育明 郑有良 《园艺学报》 CAS 北大核心 2006年第2期349-355,共7页
利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,R... 利用RAPD、叶绿体和线粒体基因组PCRRFLP标记系统评价了大花蕙兰20个品种的遗传多样性。在50个RAPD引物分析中,有36个引物(72.0%)能揭示材料间的多态性,材料间遗传相似系数为0.503～0.765,平均0.598,根据遗传相似系数进行聚类分析表明,RAPD标记能将所有材料区分开。在7个叶绿体基因组(cpDNA)的PCRRFLP分析中,6个标记(87.5%)可扩增出1至多条清晰的谱带;扩增产物经7种限制性内切酶消化后,6个标记的19种引物/酶组合共检测到53条DNA片段,其中多态性片段有37条,占69.8%;材料间遗传相似系数变化范围为0.571～0.949,平均值为0.766。在8个线粒体基因组(mtDNA)的PCRRFLP标记分析中,只有3个(37.5%)标记能得到1条清晰的谱带;利用7种限制性内切酶对3个标记的扩增产物消化后,在10种标记/酶组合中,共检测到33条酶切片段,其中21条(63.6%)具有多态性;遗传相似系数为0.634～1.000,平均0.829。这些结果表明,RAPD标记揭示的大花蕙兰遗传多样性最高,其次为cpDNAPCRRFLP标记,而mtDNAPCRRFLP标记揭示的遗传多样性最低。 展开更多
关键词 大花蕙兰 RAPD PCR-RFLP cpDNA mtDNA
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三大不同品种马mtDNA Cytb基因PCR-RFLP分析 认领 引用 被引量：16
12
作者 李金莲 石有斐 +1 位作者 布仁其其格 芒来 《遗传》 CAS 北大核心 2006年第8期933-938,共6页
用BamHⅠ、TaqⅠ、HaeⅢ、RsaⅠ和HincⅡ5种限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种的6个类型(纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、乌审马和矮马)共256匹马的mtDNACytb基因部分序列多态性。用8%非变... 用BamHⅠ、TaqⅠ、HaeⅢ、RsaⅠ和HincⅡ5种限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种的6个类型(纯血马、三河马、乌珠穆沁马、锡尼河马、乌审马和矮马)共256匹马的mtDNACytb基因部分序列多态性。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将酶切产物分离,并用银染法显色。结果BamHⅠ和TaqⅠ表现出多态,5种酶共检测到7种态型,归纳为3种单倍型,以单倍型Ⅰ和Ⅲ为主体单倍型,但通过一个特殊的酶型BamHⅠ-B分析推测所研究的马可能起源于一个母系祖先。 展开更多
关键词 限制性内切酶 PCR-RFLP 马mtDNA Cytb基因 多态性
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PCR-RFLP定量检测川贝母真伪的研究 认领 引用 被引量：14
13
作者 赵仲麟 常志远 +4 位作者 袁超 李瑞歌 王成 王永 兰青阔 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期249-253,共5页
建立了一个适合中药材川贝母的聚合酶链式反应-限制性内切酶(PCR-RFLP)的分子鉴定方法。以提取的DNA为模板进行PCR扩增和酶切反应,真品川贝母扩增产物含有Sam I酶切位点,在100~250 bp之间存在明确的2条酶切条带,而伪品贝母扩增序列中没... 建立了一个适合中药材川贝母的聚合酶链式反应-限制性内切酶(PCR-RFLP)的分子鉴定方法。以提取的DNA为模板进行PCR扩增和酶切反应,真品川贝母扩增产物含有Sam I酶切位点,在100~250 bp之间存在明确的2条酶切条带,而伪品贝母扩增序列中没有Sam I酶切位点不能被切出。此外,还基于PCR-RFLP技术针对川贝母真伪性进行了相对定量分析研究。结果表明,含量10%及以上的真品川贝母能被稳定检测出。 展开更多
关键词 川贝母 分子鉴定 PCR-RFLP
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应用PCR-RFLP技术鉴别区分中国沿海四种主要养殖扇贝 认领 引用 被引量：9
14
作者 王师 包振民 +5 位作者 张玲玲 李宁 战爱斌 郭文波 汪小龙 胡景杰 《食品科学》 CAS 北大核心 2006年第7期210-214,共5页
扇贝的物种鉴定,通常主要是依据形态学标准来进行。然而,当用于形态辨别的部分被去除时,对扇贝的物种鉴定工作则显得十分困难。本研究利用对扇贝核糖体ITS的PCR-RFLP分析,首次从分子水平上鉴定区分了中国沿海四种主要的养殖扇贝(栉孔扇... 扇贝的物种鉴定,通常主要是依据形态学标准来进行。然而,当用于形态辨别的部分被去除时,对扇贝的物种鉴定工作则显得十分困难。本研究利用对扇贝核糖体ITS的PCR-RFLP分析,首次从分子水平上鉴定区分了中国沿海四种主要的养殖扇贝(栉孔扇贝、华贵栉孔扇贝、虾夷扇贝及海湾扇贝)。根据四种扇贝ITS的测序结果,选取三种内切酶(SmaI、MseI及TaqI)应用于PCR-RFLP分析。根据三种内切酶产生的酶切图谱,四种扇贝可被有效鉴别区分。酶切结果在四种扇贝各群体间的稳定性,证明了利用该技术对四种扇贝进行物种鉴定的可行性。本研究同时成功地对扇贝加工品-干贝进行了物种鉴定,证明了该技术在实践中应用的可行性。 展开更多
关键词 扇贝 物种鉴定 干贝 PCR-RFLP ITS
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利用PCR-RFLP方法鉴别黄曲霉毒素产毒菌株 认领 引用 被引量：14
15
作者 孙长坡 常晓娇 +1 位作者 伍松陵 沈晗 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期3675-3683,共9页
【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信... 【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP方法对产毒菌株区分结果,利用大豆培养基对上述菌株进行发酵培养,并利用HPLC方法测定了菌株产毒能力。【结果】生物信息学分析结果表明黄曲霉毒素可能产生菌株的aflR高度同源,但启动子和结构基因的部分碱基出现了规律性变异,并导致了限制性酶切图谱中的NheⅠ、PvuⅡ和HincⅡ等限制性酶切位点的改变;通过提取各菌株基因组DNA,PCR扩增得到aflR和启动子序列片段,测序得知片段长度分别为798 bp和515bp;PCR-RFLP鉴定结果表明产生黄曲霉毒素菌株的aflR启动子片段经NheⅠ酶切后得到176 bp和339 bp 2个片段,不产毒菌株无该限制性酶切位点;试验进一步对黄曲霉菌和寄生曲霉菌aflR结构基因的分析发现,利用HincⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR的结构基因,可以分别得到3个片段(387、250和161 bp)和2个片段(548、250 bp);利用PvuⅡ分别处理黄曲霉和寄生曲霉的aflR结构基因,可以分别得到2个片段(652、146 bp)和3个片段(413、239和146 bp);产毒试验表明,米曲霉菌和酱油曲霉菌不产生黄曲霉毒素,PCR-RFLP分析表明不产毒的黄曲霉菌的确丧失了产生黄曲霉毒素的能力;产生黄曲霉毒素各曲霉菌株之间产毒能力差异显著,不但产生的黄曲霉毒素总量高低相差几十倍,其产生的黄曲霉毒素组分也不尽相同。【结论】本研究阐明了在可能产生黄曲霉毒素关键基因aflR序列中存在的差异,通过PCR-RFLP方法快速鉴别黄曲霉菌株产毒与否,并且对黄曲霉和寄生曲霉两种曲霉进行了区分。黄曲霉毒素产生菌株鉴定方法的开发,将为粮油食品安全检测和质量控制,粮食食品生产过程的质量安全控制与监测提供基于分子水平的新型技术。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素 aflR基因 PCR-RFLP 产毒菌株鉴别
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麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的PCR-RFLP鉴别方法研究 认领 引用 被引量：9
16
作者 张林祥 倪琳 +2 位作者 赖晶 魏锋 宋平顺 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期712-720,共9页
目的:通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP法)建立一种能快速鉴别麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的方法。方法:对麦冬和山麦冬的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点进行比对,选择山麦冬的特异性酶切位点PmlI,设计PCR-... 目的:通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP法)建立一种能快速鉴别麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的方法。方法:对麦冬和山麦冬的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点进行比对,选择山麦冬的特异性酶切位点PmlI,设计PCR-RFLP反应引物。以退火温度58℃、循环数为30,LR-F和LR-R鉴别引物(10μmol·L-1)各0.5μL,PmlI限制性内切酶在37℃酶切2 h的反应条件为PCR-RFLP法的参数,并进行方法学考察和统计分析。结果:在退火温度58℃、循环数为30时,山麦冬或掺有山麦冬的麦冬样品经过特异性引物扩增后,能被PmlI限制性内切酶酶切,在100~250 bp之间检出2条单一DNA条带,麦冬样品则无此条带。该方法稳定性好,专属性强,能对麦冬与山麦冬饮片及掺混样品进行鉴别,并对麦冬中掺入山麦冬的检出限为5%。结论:建立的PCR-RFLP鉴别方法稳定性好,灵敏度高,实现了麦冬与山麦冬饮片及麦冬中掺混山麦冬的快速检测,可用于麦冬与山麦冬药材真伪鉴别的补充检验方法。 展开更多
关键词 麦冬 山麦冬 掺混鉴别 PCR-RFLP转录间隔区(ITS) 特异性限制酶 鉴定
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不同猪种IGF2基因PCR-RFLP多态性与部分生长性状相关性分析 认领 引用 被引量：14
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作者 刘鑫 施启顺 +2 位作者 柳小春 黄生强 蒋隽 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期63-66,共4页
以IGF2基因作为控制猪生长性状主基因的候选基因,采用PCR-RFLP方法对7个品种/群体共528头猪进行了NciⅠ酶切位点基因型检测,计算了该位点的基因频率与基因型频率,并对品种间基因型频率进行了x2差异性检验.结合生长性能记录,运用SAS软件... 以IGF2基因作为控制猪生长性状主基因的候选基因,采用PCR-RFLP方法对7个品种/群体共528头猪进行了NciⅠ酶切位点基因型检测,计算了该位点的基因频率与基因型频率,并对品种间基因型频率进行了x2差异性检验.结合生长性能记录,运用SAS软件分析了IGF2不同基因型对生长性状的遗传效应.结果表明:在杜洛克、长白、大白中,AA基因型比BB基因型生长速率快,生长性能指数高4.06%～8.31%,等位基因A对猪的生长具有正效应. 展开更多
关键词 IGF2基因 PCR-RFLP 生长性状 相关性分析
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基于ITS序列PCR-RFLP鉴别木香、川木香和藏木香 认领 引用 被引量：8
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作者 燕梦遥 宋平顺 +3 位作者 赖晶 郭晔红 倪琳 朱喜春 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期339-346,共8页
目的利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,建立快速鉴别木香、川木香和藏木香的方法。方法通过比对木香、川木香和藏木香3个物种ITS基因序列,筛选限制性内切酶并设计鉴别引物。优化PCR扩增和酶切反应条件,并进行方... 目的利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,建立快速鉴别木香、川木香和藏木香的方法。方法通过比对木香、川木香和藏木香3个物种ITS基因序列,筛选限制性内切酶并设计鉴别引物。优化PCR扩增和酶切反应条件,并进行方法学考察和统计学分析。结果退火温度为60℃、循环数为30时,能检出500~750 bp单一DNA条带;底物为10μL、酶切时间为15 min时,BsaHⅠ酶可将木香、川木香及藏木香在一定范围内切割成大小不一的DNA条带,方法学和统计学结果较好。结论建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别木香、川木香及藏木香3种药材,避免此3类药材的混用,保证临床用药安全。 展开更多
关键词 木香 川木香 藏木香 PCR-RFLP法 ITS序列
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基于PCR-RFLP的西洋参和人参指纹特征鉴定 认领 引用 被引量：14
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作者 王雪松 周雨晴 +3 位作者 李丹 夏薇 李明 李明成 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2018年第1期49-52,共4页
目的建立西洋参与人参限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的鉴定方法.方法采用改良的CTAB法从西洋参和人参中提取基因组DNA.应用生物信息学软件设计西... 目的建立西洋参与人参限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)的鉴定方法.方法采用改良的CTAB法从西洋参和人参中提取基因组DNA.应用生物信息学软件设计西洋参与人参核糖体DNA ITS序列的特异性引物,利用PCR技术对指定序列进行扩增,并通过RFLP方法酶切后进行指纹图谱的鉴别比较.结果提取西洋参与人参基因组DNA19 kb,并扩增核糖体122 bp大小的基因片段,经酶切后西洋参为80 bp和42 bp长度的两条片段,而人参仍然为122 bp长度的单一片段.结论西洋参与人参DNA具有特异性酶切位点,可作为西洋参与人参鉴定的有效方法,该方法简便快速,结果可靠. 展开更多
关键词 西洋参 人参 PCR-RFLP方法 DNA酶切
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多浪羊MHC-DRB3基因座的PCR-RFLP多态性分析 认领 引用 被引量：21
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作者 刘云芳 剡根强 王新峰 《遗传》 CAS 北大核心 2004年第1期59-62,共4页
主要组织相容性复合体(MHC)是由紧密连锁的高度多态的基因位点所组成的染色体上的一个遗传区域,它在动物机体的免疫系统中发挥着非常重要的作用。应用PCR RFLP技术首次对多浪羊的MHC DRB3的外显子2进行分子遗传多态性检测与分析。结果显... 主要组织相容性复合体(MHC)是由紧密连锁的高度多态的基因位点所组成的染色体上的一个遗传区域,它在动物机体的免疫系统中发挥着非常重要的作用。应用PCR RFLP技术首次对多浪羊的MHC DRB3的外显子2进行分子遗传多态性检测与分析。结果显示,多浪羊MHC DRB3基因的外显子2在TaqⅠ、PstⅠ和HaeⅢ酶切位点存在多态,其酶切位点分别由2、2和6种共显性等位基因控制。综合3种酶切结果,本实验研究在多浪羊中检测到了DRB3基因的24种等位基因。 展开更多
关键词 多浪羊 分子遗传多态性 PCR-RFLP MHC-DRB3基因座
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